不同粒径聚乙二醇化维生素K1脂质体的制备及体内外评价

目的制备不同粒径聚乙二醇化维生素K1(VK1)脂质体,并对其进行制剂学表征,考察体内药动学和促凝药效.方法采用薄膜分散法制备不同粒径的VK1脂质体,采用马尔文粒径仪测定粒径、聚合物分散性指数(PDI)、Zeta电位;透射电子显微镜观察形态;以粒径为指标,考察脂质体在4℃下储存1个月、在磷酸缓冲液(PBS,pH 6.8)及pH 1.2水溶液中48 h的稳定性;采用超滤离心法测定包封率与载药量;采用大鼠在体肠吸收模型考察肠吸收特性;ig给药考察脂质体在大鼠体内药动学行为;以华法林钠诱导大鼠低凝血酶原血症,采用ELISA试剂盒检测血浆中凝血因子Ⅱ、V、Ⅶ和Ⅸ含量,检测凝血酶原时间(PT),评价不同粒径VK1脂质体(2mg·kg-1)促凝效果.结果制备了 3种VK1脂质体(Lip-180、Lip-120、Lip-60),粒径分别为(182.40±2.17)nm、(114.38±0.60)nm和(68.42±0.73)nm,PDI分别 为 0.21 士0.01、0.12±0.00 和0.17±0.01,电位分别为(-27.67±1.58)、(-22.93+1.81)、(-26.63±1.37)mV,脂质体均呈球形,分布均匀,包封率均＞90％,载药量均＞2.90％,稳定性良好.与Lip-180相比,Lip-120和Lip-60表现出更缓慢的释放性能和更好的跨膜吸收速率.Lip-120及Lip-60的药时曲线下面积(AUC0-∞)分别是Lip-180的1.52和1.80倍,并且Lip-120与Lip-60的AUC0-∞分别是维生素K1注射剂(市售对照)的1.24与1.46倍.与低凝血酶原血症模型大鼠比较,经ig给药Lip-180、Lip-120、Lip-60及维生素K1注射剂后,PT显著降低(P＜0.001),凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、X水平均升高,其中,Lip-60作用最显著,除给药后6h的凝血因子Ⅹ外,均差异显著(P＜0.05、0.01、0.001).结论聚乙二醇化VK1脂质体分布均匀,稳定性高,释放缓慢,口服生物利用度高,体内促凝效果较好,优选粒径最小的Lip-60.