数字PCR法检测血液EGFR基因T790M突变的评价

目的 使用血浆循环肿瘤DNA基因突变检测国家参考品,对EGFR基因T790M突变检测试剂盒(数字PCR法)的准确性、特异性和检测限的性能进行评价.方法 提取国家参考品的血浆游离DNA,并测定浓度.取不同浓度的EGFR基因T790M突变的游离DNA样本,加入装有ddPCR和ddPCR MIX3的PCR预混液的PCR管中,混匀后使用全自动样本处理系统进行微滴制备.将微滴转入96孔板内后,使用微滴式数字PCR系统的封膜仪和PCR仪进行封膜和PCR扩增.取PCR扩增样本,加至芯片中,使用生物芯片阅读仪读取结果.结果 对国家参考品中不同突变频率的EGFR基因T790M突变样本,试剂盒能够准确检出T790M突变.对国家参考品中EGFR基因其他突变的样本,试剂盒未检出T790M突变.试剂盒能够准确检测0.05％突变频率的国家检测限参考品.结论 EGFR基因T790M突变检测试剂盒(数字PCR法)具有很好的检测准确性、特异性和灵敏度,国家参考品具有很好的检测方法适用性.