侵染西番莲的三种马铃薯Y病毒属病毒的广谱单克隆抗体制备及检测应用

马铃薯Y病毒属(Potyvirus)的夜来香花叶病毒(Telosma mosaic virus,TelMV)、东亚西番莲病毒(East Asian passiflora virus,EAPV)和西番莲重型斑驳相关病毒(Passion fruit severe mottle-associated virus,PFSMaV)严重危害我国西番莲(Passiflora edulis)产业.迄今植物病毒没有有效的防治药剂,而病毒检测技术是植物病毒防控手段建立的关键.本研究利用田间采集的TelMV、EAPV和PFSMaV三种病毒复合侵染的西番莲,从病叶提纯病毒粒子,以混合病毒粒子作为BALB/c小鼠(Mus musculus)的免疫原,通过杂交瘤技术获得能特异、广谱检测这3种病毒的单克隆抗体.Western blot检测发现,研制的4株单克隆抗体能同时识别TelMV、EAPV和PFSMaV的衣壳蛋白.进一步以制备的病毒单抗为检测抗体,建立用于快速检测这3种病毒的血清学检测方法,即斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)和组织印迹酶联免疫吸附试验(Tissue print-ELISA).特异性和广谱性测定结果表明,建立的2种血清学方法均能简单快速、特异灵敏、广谱高效地检测西番莲中的TelMV、EAPV和PFSMaV,而检测感染同属的李痘病毒(Plumpox virus,PPV)、马铃薯Y病毒(Potato Virus Y,PVY)、马铃薯A病毒(Potato Virus A,PVA)和芜菁花叶病毒(Turnip mosaic virus,TuMV)病叶、感染黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)和西番莲潜隐病毒(Passiflora latent virus,PLV)的病叶及健康西番莲叶片均呈阴性反应.灵敏度测定结果表明,Dot-ELISA方法检测病叶粗提液的灵敏度高达1:20480(W/V,g/mL)倍稀释,即绝对检出量为0.0976 ng感病植物组织.田间样品的检测结果表明,建立的2种血清学方法能准确、广谱、灵敏地用于检测侵染西番莲的3种马铃薯Y病毒属病毒,其结果与RT-PCR的符合率达到100％.本研究为TelMV、EAPV和PFSMaV三种病毒的检测诊断、无毒种子种苗生产及其科学防控提供技术支持.