新型冠状病毒614D和614G假病毒生物学特性研究

目的:利用HIV慢病毒包装系统构建新型冠状病毒(2019 novel coronavirus，2019-nCoV)原始株614D和突变株614G假病毒，并初步研究其生物学特性。方法:将重组表达质粒pCDNA3.1-614D和pCDNA3.1-614G分别与慢病毒质粒psPAX2和pLenti CMV Puro LUC瞬时共转染293T细胞，72 h后收集上清，进行20%蔗糖垫层超速离心，检测假病毒的滴度、形态、S蛋白表达和中和活性。结果:间接免疫荧光检测可见S蛋白特异性荧光，Western blot分析可见2019-nCoV 614D和614G假病毒S蛋白表达，透射电镜下可见假病毒颗粒具有明显刺突。614D和614G假病毒的滴度分别为1.12×10 4和2.52×10 4 TCID 50/ml，均能够中和S蛋白兔多克隆抗体，表明假病毒具有特异性。 结论:本研究成功构建了2019-nCoV 614D和614G假病毒，为建立基于假病毒的体外中和抗体检测平台奠定基础。