低剂量地西他滨对免疫性血小板减少症患者来源的骨髓间充质干细胞生物学行为的影响

目的·研究低剂量地西他滨对原发免疫性血小板减少症(immune thrombocytopenia,ITP)患者来源的骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)增殖、凋亡等生物学行为的影响.方法·纳入2020年4月-2021年10月上海交通大学医学院附属仁济医院血液科门诊或住院的ITP发病期患者10例,以及10例无骨髓异常的非ITP患者作为对照(normal control,NC),收集骨髓穿刺标本,分离MSC,流式细胞术检测其表面抗原标志物.使用CCK-8试剂盒和EdU细胞增殖检测试剂盒检测及比较ITP患者来源(MSC-ITP)和对照组来源(MSC-NC)的MSC增殖水平差异,并使用微管荧光探针检测细胞形态的变化.使用Hoechst 33258染色观察细胞凋亡情况,采用Annexin V-FITC/PI细胞凋亡双染试剂盒检测细胞凋亡水平.通过不同浓度的地西他滨以不同的时长处理MSC-ITP,探索地西他滨促其增殖的最佳浓度及处理时间.以最佳浓度的地西他滨处理MSC-ITP,观察其对细胞凋亡水平的影响.Western blotting检测细胞凋亡相关通路蛋白的表达,以及地西他滨的影响.结果·与MSC-NC相比,MSC-ITP细胞形态异常,细胞核碎裂、皱缩较多,体外增殖水平减弱,基础凋亡率增加.地西他滨刺激MSC-ITP增殖的最佳工作浓度为2.5 μmol/L,最佳处理时间为24 h.2.5 μmol/L地西他滨处理MSC-ITP 24 h后细胞核形态得到改善,细胞核的碎裂和凝聚减少,凋亡率显著降低(P＜0.05).Western blotting结果表明,地西他滨处理后,MSC-ITP中线粒体凋亡通路相关蛋白BAX降低,胱天蛋白酶(caspase3)和cleaved-caspase3减少(均P＜0.05).结论·ITP患者骨髓来源的MSC形态异常,体外增殖水平减弱,基础凋亡率增加;低剂量地西他滨可以促进该细胞增殖,抑制其凋亡;该作用可能是通过线粒体凋亡途径介导的.