基于肠道菌群探讨补脾益肾方改善5/6肾切除大鼠肠道屏障延缓慢性肾脏病进展的作用机制

目的 探讨补脾益肾方延缓5/6肾切除大鼠慢性肾脏病进展的作用机制.方法 雄性SD大鼠随机分为4组:假手术组、5/6肾切除模型组、补脾益肾方低剂量组、补脾益肾方高剂量组.假手术组和5/6肾切除模型组予蒸馏水灌胃,补脾益肾方低剂量组和高剂量组分别给予低剂量和高剂量补脾益肾方治疗,灌胃为期4周.检测各组大鼠血肌酐、尿素氮、24 h尿蛋白定量、硫酸吲哚酚、二胺氧化酶;肾脏组织采用PAS和Masson染色;结肠组织采用HE染色;Western-blot检测ZO-1、Occludin、Claudin-1三种紧密连接蛋白及IL-22在结肠组织的表达水平;采用16S rDNA高通量测序并进行生物信息学分析.结果 与假手术组相比,5/6肾切除组大鼠的血肌酐、尿素氮、24 h尿蛋白定量、血清硫酸吲哚酚和二胺氧化酶水平明显升高;与5/6肾切除组相比,补脾益肾方高剂量组大鼠的血肌酐、尿素氮、24 h尿蛋白定量、血清硫酸吲哚酚和二胺氧化酶水平明显下降,肾脏病理损伤缓解;补脾益肾方亦可调整肠道菌群,提高益生菌Prevotella(普氏菌属)、Phascolarctobacterium(考拉杆菌属)和Megamonas(巨单胞菌属)的相对丰度,降低Clostridiaceae(梭菌科)、Haloplasmataceae(盐扁菌科)、Micrococcaceae(微球菌科)、Pseudomonadaceae(假单胞菌科)和Ruminococcus(瘤胃球菌)的相对丰度;促进紧密连接蛋白(ZO-1、Occludin和Claudin-1)及IL-22的表达,减轻结肠固有层和粘膜层水肿及炎症细胞浸润;减少毒素入血,血清中的硫酸吲哚酚水平下降,进而延缓CKD进程.结论 补脾益肾方延缓5/6肾切除大鼠的CKD进展可能是通过调节肠道菌群,修复肠道屏障功能,降低血清尿毒症毒素水平,以实现肾保护作用.