逆转录聚合酶螺旋反应快速检测蜱传脑炎病毒方法的建立及初步评价

目的 建立一种等温条件下蜱传脑炎病毒(TBEV)的现场快速检测的方法.方法 针对TBEV NS1基因设计一对特异性螺旋引物,在等温条件下建立逆转录聚合酶螺旋反应(RT-PSR)检测方法,优化反应条件,对特异性和灵敏性进行分析,应用全血模拟标本评价RT-PSR检测的符合率.结果 成功建立并优化了TBEV的RT-PSR检测方法,RT-PSR法在61℃的温度下只需一种酶可一步实现逆转录和扩增,55 min可完成TBEV的检测,并可通过SYBR GreenⅠ直接肉眼判读结果,该方法特异性强,灵敏性高,最低检测限为107.341×10-6 ng/μL,是PCR的100倍.全血模拟标本符合率为100％,灵敏性比RNA标准品低10倍.结论 RT-PSR方法具有良好的特异性和灵敏性,可用于基层对TBEV的现场快速检测.