TSG-6抑制游离二氧化硅诱导骨髓巨噬细胞分泌IL-1β作用

目的 探讨肿瘤坏死因子-α刺激蛋白-6(TSG-6)对游离二氧化硅(SiO2)诱导的小鼠骨髓巨噬细胞(BMDMs)分泌促炎细胞因子白细胞介素(IL)-1β的作用及机制.方法 (1)取自小鼠骨髓中分离的BMDMs分为8组.空白对照组细胞不予任何刺激,脂多糖组细胞予质量浓度为50μg/L的脂多糖刺激;TSG-6对照组细胞予终质量浓度为100μg/L的重组小鼠TSG-6刺激;SiO2模型组细胞予质量浓度为50 μg/L的脂多糖预刺激4 h后再予终质量浓度为250 mg/L的游离SiO2混悬液刺激;4个剂量TSG-6组细胞均予质量浓度为50 μg/L的脂多糖和终质量浓度为250 mg/L的游离SiO2混悬液处理,在给予SiO2处理的同时分别加入终质量浓度为10、20、50、100μg/L的重组小鼠TSG-6干预.培养16 h后收集各组细胞,采用酶联免疫法检测BMDMs上清液中IL-1β表达量,筛选TSG-6的最佳刺激剂量.(2)收集空白对照组、脂多糖组、SiO2模型组、100μg/LTSG-6组和TSG-6对照组的细胞,采用免疫印迹法检测IL-1β及其相关通路的组分蛋白IL-1β前体、半胱氨酸蛋白酶-1(caspase-1)、caspase-1前体、凋亡相关斑点样蛋白和核苷酸结合寡聚化结构域样受体族含热蛋白结构域蛋白3(NLRP3)相对表达水平.结果 (1)SiO2模型组BMDMs上清液中IL-1β水平高于空白对照组(P＜0.01);20、50、100μg/LTSG-6组BMDMs上清液中IL-1β水平均低于Si02模型组(P值均＜0.01).选择100μg/L作为后续实验的TSG-6刺激剂量.(2)与空白对照组和脂多糖组比较,SiO2模型组BMDMs中的IL-1β、caspase-1和NLRP3相对表达水平均升高(P值均＜0.05);与SiO2模型组比较,100 μg/L TSG-6组BMDMs中的IL-1β、caspase-1和NLRP3相对表达水平均降低(P值均＜0.05).结论 TSG-6可通过下调caspase-1和NLRP3的表达来抑制BMDMs分泌促炎细胞因子IL-1ββ.