S1PR5激动剂减轻H2 O2诱导的脑微血管内皮细胞高通透性及氧化应激损伤

目的 鞘氨醇-1-磷酸酯受体5(S1PR5)在急性缺血性卒中(AIS)血脑屏障氧化应激损伤中的作用及机制尚不清楚.文章旨在探讨S1PR5在小鼠脑微血管内皮细胞(bEnd.3)氧化应激损伤中的作用及分子机制.方法 将bEnd.3细胞分为对照组、H2 O2组、H2 O2+5μmol/L A971432(S1PR5特异性选择性激动剂)组、H2 O2+10μmol/L A971432组、H2 O2+20μmol/L A971432组.用CCK-8法检测细胞活力改变;FITC-Dextran渗透法检测血管内皮细胞通透性;Western Blot检测S1PR5、ZO-1、VE-Cadherin、Occludin、Bax、Bcl2、Caspase-3、p-Erk1/2、Erk1/2、Nrf2、HO-1、SOD1和SOD2的蛋白表达水平;免疫荧光观察ZO-1的荧光强度;光学显微镜下观察细胞形态变化;DCFH-DA探针法检测细胞活性氧水平.结果 Western blot结果显示,与对照组bEnd.3细胞的S1PR5蛋白表达(1.00±0.01)相比,H2O2组(0.59±0.03)明显降低(P<0.01).与对照组相比,H2 O2显著增加血管内皮细胞通透性,减少ZO-1、VE-Cadherin、Occludin、Nrf2、HO-1、SOD1和SOD2蛋白表达以及ZO-1荧光强度,降低细胞活力,增加MMP-9、Bax/Bcl2、Caspase-3、p-Erk1/2/Erk1/2的蛋白表达和细胞内总活性氧(P<0.05).与H2 O2组[(75.33±3.76)％]相比,H2O2+10、20μmol/L A971432组[(93.34±0.49)％,(100.60±7.29)％]可以明显逆转H2O2诱导的细胞活力下降(P<0.05).与H2 O2组相比,H2 O2+5、10、20μmol/L A971432组的血管内皮细胞通透性显著降低,ZO-1、VE-Cadherin、Occludin、Nrf2、HO-1、SOD1和SOD2蛋白表达和ZO-1荧光强度增加,细胞活力增加,MMP-9、Bax/Bcl2、Caspase-3、p-Erk1/2/Erk1/2蛋白表达和细胞内总活性氧降低(P<0.05).结论 A971432选择性激动S1PR5可减轻H2O2诱导的bEnd.3内皮细胞高通透性及凋亡,并可能通过激活Nrf2/HO-1通路发挥抗氧化损伤作用.与H2 O2组相比,H2 O2+10、20μmol/L A971432组可以明显逆转H2 O2诱导的细胞活力下降(P<0.05).