小鼠Skint6基因突变对脾脏淋巴细胞亚群的影响

目的:制备Skint6基因突变小鼠模型,探究Skint6基因突变对小鼠脾脏各淋巴细胞亚群的影响.方法:利用CRISPR/Cas9技术定点突变小鼠Skint6基因,高分辨率熔解曲线(HRM)和DNA测序鉴定Skint6基因突变小鼠(B6-Skint6M);取6月龄B6-WT小鼠和B6-Skint6M小鼠,qRT-PCR检测小鼠皮肤Skint6基因mRNA水平,考马斯亮蓝G-250法测定小鼠尿蛋白水平;计算小鼠体质量、脾脏指数和总细胞数并通过流式细胞术(FACS)检测其脾脏中各淋巴细胞亚群比例并计算细胞绝对数.结果:DNA测序结果显示B6-Skint6M小鼠模型制备成功;qRT-PCR结果表明Skint6基因突变不影响皮肤Skint6 mRNA表达.B6-Skint6M小鼠尿蛋白含量明显高于B6-WT小鼠(P<0.05).Skint6基因突变对小鼠体质量、脾脏指数无显著影响(P>0.05).FACS结果表明,与B6-WT组小鼠相比,B6-Skint6M小鼠脾脏细胞数及淋巴细胞数明显增多(P<0.01);CD3+T细胞比例及细胞绝对数明显上升(P<0.01,P<0.05),CD19+B细胞比例下降(P<0.05);CD3+T淋巴细胞亚群中CD8+T细胞比例降低(P<0.01),双阴性T细胞(DNeg)比例及细胞绝对数明显上升(P<0.01,P<0.05);CD4+CD69+活化T细胞比例及细胞绝对数上升(P<0.05,P<0.01),CD4+CD44hiT细胞比例及细胞绝对数上升(P<0.01);Treg比例及细胞绝对数明显下降(P<0.001);Tfh细胞比例及细胞绝对数上升(P<0.05);Breg比例及细胞绝对数上升(P<0.05);CD3+T淋巴细胞亚群中非典型CD3+B220+T细胞比例及其细胞绝对数增高(P<0.001).结论:Skint6基因突变不影响皮肤中Skint6 mRNA表达,但可影响小鼠脾脏淋巴细胞亚群比例、细胞绝对数和活化状态,从而引起小鼠免疫功能紊乱.