HMCES蛋白促进猪流行性腹泻病毒在Vero细胞中的复制

[目的]鉴定能够调控猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)复制的关键宿主蛋白.[方法]利用LC-MS/MS技术结合串联质谱标签(tandem mass tag,TMT),分析PEDV感染Vero细胞36 h后和未感染组的蛋白组学差异.鉴定筛选了 114个显著差异表达蛋白,其中宿主胚胎干细胞特异性5-羟甲基胞嘧啶结合蛋白(5-hydroxymethylcytosine binding,ES cell-specific protein,HMCES)显著上调.进一步构建HMCES真核表达质粒,通过蛋白免疫印迹和实时荧光定量PCR检测过表达HMCES对PEDV复制的影响;合成针对HMCES基因的特异性siRNA,利用Western blotting和RT-qPCR检测siRNA对HMCES表达的干扰效果及HMCES被干扰后对PEDV复制的影响.[结果]过表达HMCES能显著促进PEDV在Vero细胞中复制,并且复制水平随着HMCES的剂量递增呈现剂量依赖式增加;siRNA-341下调内源性HMCES表达进而抑制PEDV复制.[结论]HMCES促进PEDV复制,本研究为进一步探究HMCES在抗PEDV免疫应答中的作用及机制提供了参考依据.