扬子鳄FoxO1基因CDS序列的克隆及其在初孵鳄性腺组织的时空表达规律

研究以初孵扬子鳄(Alligator sinensis)性腺组织为实验材料,开展Forkhead box家族蛋白-1(FoxO1)基因CDS区克隆和序列特征分析.利用免疫组织化学检测其在胃、肠和肺脏等组织中的表达谱,结合免疫荧光(IF)、RT-PCR和Western Blot探讨其在不同出壳后日龄(17日龄、63日龄和96日龄)雌性扬子鳄性腺组织中的时空表达规律,探讨其在雌性扬子鳄性腺发育过程中的生物学功能.研究成功克隆获得FoxO1基因长度为1941 bp的完整编码区及646个预测编码氨基酸序列.与其他物种间进行同源性比对和构建进化树分析发现,扬子鳄FoxO1基因与鸟类的亲缘关系相较中华鳖(Pelodiscus sinensis)和原矛头蝮(Protobothrops mucro-squamatus)等爬行动物更近.在其他脊椎动物中,哺乳动物、硬骨鱼和两栖物种也各自聚类称为子群,表明FoxO1兼具功能保守性和种间特异性;免疫组织化学结果表明FoxO1在初孵鳄性腺复合体、肺、胃和肠中均有表达,免疫荧光结果表明17日龄性腺组织中的FoxO1主要表达于肾上腺和中肾区但在皮质部呈微弱表达,在63日龄性腺皮质部表达逐渐上调且呈无规则随机分布,在96日龄性腺皮质部中卵母细胞发育程度更高的位置呈强表达;RT-PCR结果表明不同时期扬子鳄性腺组织FoxO1基因mRNA表达量差异不显著,Western Blot结果显示性腺组织中的FoxO1表达量呈先上升后下降的变化模式,表现为63日龄FoxO1基因表达量显著高于17日龄和96日龄,相关结果对于丰富扬子鳄卵子发生调控机制提供了重要的研究参考.