二苯乙烯苷抑制氧化应激介导骨质疏松的作用及机制研究

目的 研究二苯乙烯苷(tetrahydroxy stilbene-2-o-β-d-glycoside,TSG)对氧化应激导致的骨质疏松的保护作用,并初步探讨相关机制.方法 不同浓度TSG预处理MC3T3-E124 h,200μM H2O2处理24 h,实验分组:①空白对照组;②H2O2处理组;③H2O2+TSG 1μM处理组;④H2O2+TSG 10μM处理组;⑤H2O2+NAC 1mM处理组,通过CCK-8检测细胞活性;RT-PCR检测细胞中TCF及其下游基因(AXIN2、ALP、OPG)、FoxO3a及其下游基因(GADD45、CAT)的mRNA表达;Western blot检测细胞中β-catenin、FoxO3a蛋白表达情况.30只9周龄BALB/c雌性小鼠,随机分为5组:①基础组:标记为C;②假手术组+溶剂组:标记为J;③去卵巢模型组+溶剂组:标记为MC;④去卵巢模型组+TSG(40 mg/ml):标记为T;⑤去卵巢模型组+雌激素:标记为E.术后7 d开始给药,共90 d,每天给药40 mg/kg小鼠体质量,取血清用于检测活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS)水平;HE染色用于小鼠骨组织形态学评价;RT-PCR检测骨组织中FoxO3a、TCF及其下游基因的mRNA表达.结果 不同浓度TSG预处理后,细胞活性降低现象得到改善;Western-blot结果提示,H2O2作用可以提高FoxO3a蛋白表达,不同浓度TSG预处理后,FoxO3a蛋白表达下降;去卵巢小鼠血清中ROS水平升高(P<0.01);T组可以明显改善血清中ROS水平(P<0.05);HE染色结果提示,去卵巢小鼠骨量减少,骨小梁数量减少,间距增大,给予TSG处理后,骨小梁数量及间距有不同程度改变.RT-PCR结果提示,在细胞层面及小鼠去卵巢OP模型中,氧化应激可上调FoxO3a及其下游基因的mRNA表达,下调TCF及其下游基因的表达(P<0.01),给予不同浓度TSG预处理后,FoxO3a、TCF及其下游基因的表达得到改善(P<0.05).结论 氧化应激可以导致成骨前体细胞MC3T3-E1死亡增加,导致小鼠骨量减少,TSG可以通过调控WNT/FoxO3a信号通路来抑制氧化应激介导骨质疏松的发生.