神经干细胞微囊泡抑制H2O2诱导DRG神经元氧化应激损伤机制研究

目的 探究神经干细胞微囊泡(neural stem cell microvesicles,NSC-MVs)对H2O2诱导背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)神经元氧化应激损伤的作用及机制.方法 超速离心提取NSC-MVs,并进行电镜和纳米颗粒示踪分析.原代培养大鼠DRG神经元,β-tubulinⅢ荧光染色.建立H2O2诱导DRG神经元氧化应激损伤模型,确定作用浓度.经NSC-MVs预处理,MTT(四唑盐)检测神经元活力,流式细胞术检测AnnexinⅤ和PI,蛋白质印迹检测凋亡相关蛋白cleaved caspase 3,cleaved caspase 9,Bax和Bcl-2的表达.结果 NSC-MVs在透射电镜下呈圆盘状,包膜完整,纳米颗粒示踪显示其粒径为50～450 nm.MTT结果显示,与对照组相比,H2O2组神经元活力明显抑制.当H2O2浓度为25,50,100和200μmol/L时具有显著性差异,细胞活力分别为84.4％,73.7％,69.8％和49.5％(F=127.7,P<0.01).经100,200和400μg/ml的NSC-MVs预处理DRG神经元,细胞活力得到明显提升,分别为51.4％,67.4％和73.5％(F=49.47,P=0.023).流式细胞术检测结果显示,与对照组相比,H2O2组神经元凋亡率显著上升(P<0.05),NSC-MVs预处理组细胞凋亡率明显下降(P<0.05).蛋白质印迹结果显示,与H2O2组相比,NSC-MVs显著抑制cleaved caspase3,cleaved caspase 9和Bax蛋白表达(均P<0.05),上调Bcl-2蛋白表达(P<0.05).结论 NSC-MVs能够抑制H2O2诱导DRG神经元氧化应激损伤,发挥神经保护作用.