A20在调节性T细胞IL-2信号通路中的作用研究

目的 研究A20(ubiquitin E3 ligase A20)对调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)中白细胞介素2(IL-2)信号通路的影响.方法 将A20flox/flox小鼠与CD4–cre小鼠杂交,得到在CD4+T细胞中A20基因条件敲除的CD4–cre A20flox/flox小鼠作为实验组,A20flox/flox小鼠作为对照组.体外实验分别分离实验组和对照组胸腺和脾脏淋巴细胞,流式细胞术检测Treg表面标记分子CTLA-4、CD73、FR4、GITR表达水平,加入IL-2刺激体外培养的Treg细胞,分别使用pStat5,pERK1/2和pAKT抗体标记,检测磷酸化水平.体内实验尾静脉注射实验组和对照组Treg和正常效应T细胞组合,观察体重变化,探讨不同组Treg的功能变化,尾静脉分别注射5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)追踪Treg的增殖来源,膜联蛋白V(AnmeXin V)标记流式细胞术分析细胞凋亡情况.结果 A20基因条件敲除小鼠的T细胞发育没有明显缺陷,胸腺和外周淋巴组织Treg的比例和数量显著增加,并在体内表现出正常的抑制作用,IL-2信号通路中的Stat5表达明显增强.结论 A20在Treg增殖中起重要负调控作用,主要通过抑制IL-2信号通路中Stat5的磷酸化,抑制IL-2分泌和Treg细胞增殖.