肌酸激酶CKBB在氧化应激压力下的降解机制

目的 神经元中的肌酸激酶CKBB是维持细胞正常能量代谢平衡的关键调节蛋白,它对神经退变神经元内的氧化应激压力敏感且含量随病变发生而降低,但其蛋白水平改变的原因尚未阐明.方法 采用过氧化氢处理SH-SY5Y神经细胞,研究CKBB在氧化应激条件下的降解机制.使用MTT法对细胞活力进行检测,利用Hoechst33342染色细胞核表征细胞生存状态.使用Western blot法对CKBB的含量进行检测.分别使用自噬抑制剂Bafilomycin A1及蛋白酶体抑制剂MG-132处理细胞,验证CKBB具体降解途径.采用激光共聚焦显微镜检测胞内RFP-LC3,GFP-CKBB共定位情况.使用免疫沉淀法抓取CKBB蛋白,对泛素化修饰进行检测.结果 在过氧化氢处理下CK-BB含量明显下降,使用自噬抑制剂及蛋白酶体抑制剂处理对CKBB的含量均有明显挽回作用.过氧化氢处理,促进CKBB与LC3共定位,并导致CKBB泛素化修饰水平显著升高.结论 CKBB在过氧化氢处理的氧化应激条件下,经由自噬及蛋白酶体两条途径发生蛋白降解.