F型肉毒毒素单克隆抗体的筛选及评价

研究以筛选得到中和抗体为目的,通过抗体制备的常用手段——杂交瘤技术进行,以F型肉毒毒素受体结合结构域FHc端作为单克隆抗体的筛选抗原.利用现有抗原FHc蛋白辅助佐剂对动物进行免疫,免疫结束后无菌环境中取动物脾细胞,与预先培养的SP2/0细胞融合后HAT选择性培养基筛选得到阳性杂交瘤细胞株,大量培养后通过体内诱生法制备单抗,纯化后对所得鼠源抗体各指标进行评价,结果测得该单抗亚型为IgG1,κ型、经过Protein G柱纯化后抗体纯度可达到98％以上、与FHc端结构域亲和力可达到5.2×10-8mol/L、轻重链基因调取后经Igblast tool分析得抗体可变区中轻链及重链CDR3区氨基酸序列为QHIRELTR、ARWLGDYAMDY,采用10倍半数致死量进行攻毒实验可得,该抗体中和效价在200 LD50/mg,当抗体量达到50pg就可以实现完全保护.实验通过细胞融合的方式,在聚乙二醇的化学刺激下,筛得一株阳性杂交瘤细胞株,取细胞上清,以亲和力作为筛选指标,得到了一株针对F型肉毒毒素受体结合结构域FHc端的具有高亲和力和并同时具有中和效果的鼠源单克隆抗体,所得单抗为具有潜在临床应用价值的鼠源单克隆抗体,为后续治疗药物的开发即鼠源抗体人源化奠定了基础.