长链非编码RNA NEAT1靶向微小RNA-149-5p调控蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白信号通路促进脑胶质瘤细胞增殖和转移的研究

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)NEAT1靶向微小RNA(miR)-149-5p对于脑胶质瘤细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其分子机制.方法 采用Lipofectamine 2000进行细胞转染构建si-NEAT1组、过表达miR-149-5p组和miR-149-5p抑制组,细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖抑制率,双荧光素酶报告基因分析Lnc NEAT1靶向调控miR-149-5p,Transwell小室法检测迁移和侵袭细胞数,蛋白质印迹法(Western blot)检测蛋白表达,组间比较采用t检验.结果 人胶质瘤细胞U251 中 NEAT1 水平(1.03±0.05)明显增加(t=13.613,P＜0.01),而 miR-149-5p(0.41±0.07)则是明显降低(t=12.111,P＜0.01).抑制NEAT1表达,si-NEAT1组细胞增殖抑制率明显增加[(29.48±2.67)％,t=13.809,P＜0.01],而细胞迁移数[(35.33±7.57)个]和侵袭数[(27.33±6.81)个]则明显降低(t=4.395、4.962,P＜0.05),磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)和磷酸化雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)水平明显降低(t=6.959、8.661,P＜0.05).过表达miR-149-5p,细胞增殖抑制率[(29.32±6.41)％]同样明显增加(t=6.922,P＜0.05),细胞迁移数(35.67±6.51)和侵袭数(28.00±8.89)同样明显降低(t=4.392、4.471,P＜0.05),p-Akt 和 p-mTOR 水平明显降低(t=4.337、9.981,P＜0.05).NEAT1-WT 活性受到 miR-149-5p 的抑制(t=15.251,P＜0.01),转染pc-DNA-NEAT1 能显著降低 miR-149-5p(t=8.178,P＜0.01),而转染 si-NEAT1 则明显上调 miR-149-5p(t=5.988,P＜0.05).与 si-NEAT1+抗 NC 组比较,si-NEAT1+抗 miR-149-5p 组细胞增殖抑制率表达明显降低(t=7.955、13.261,P＜0.05),而迁移细胞数、侵袭细胞数、p-Akt和p-mTOR水平明显增加(t=4.841、3.784、5.589、4.572,P＜0.05).结论 Lnc NEAT1 靶向 miR-149-5p 调控 Akt/mTOR信号通路可促进脑胶质瘤细胞增殖和转移,抑制miR-149-5p表达可逆转抑制Lnc NEAT1表达后对于脑胶质瘤细胞增殖和转移的影响.