双外标校准高效液相色谱法同时测定中药牛膝中皂苷类成分和甾酮类成分

牛膝现行的质量标准难以有效控制其质量.本研究运用双外标结合校正因子,同时测定牛膝中牛膝皂苷C、牛膝皂苷D、β-蜕皮甾酮、25R-牛膝甾酮和25S-牛膝甾酮的含量.采用Agilent Poroshell 120 EC-C18(150 mm×4.6 mm,2.7 μm)色谱柱,流动相为0.1％磷酸乙腈-0.1％磷酸水溶液梯度洗脱,流速0.8 mL·min-1,柱温35℃,进样量5 μL,分析时间30 min.分别以β-蜕皮甾酮和牛膝皂苷D为对照,计算25R-牛膝甾酮、25S-牛膝甾酮和牛膝皂苷C的相对校正因子(relative correction factors,RCF)和相对保留时间(relative retention time,RRT),25R-牛膝甾酮、25S-牛膝甾酮和牛膝皂苷C的相对校正因子分别为1.116、1.056和0.888 1,不同条件下RCF稳定性良好.分别使用外标法和双外标校准法对20批不同来源牛膝样品的含量进行计算,两种方法所得结果相对误差(relative error,RE)小于5％,表明建立的双外标校准法同时测定牛膝中5种成分准确可行.含量测定结果显示牛膝2种皂苷和3种甾酮的含量分别为0.597％～1.916％和0.044％～0.150％,皂苷含量约为甾酮的10倍,提示牛膝皂苷是牛膝药材质量的关键成分.该研究结果为牛膝药材提供了科学可行的整体质量评价方法.