鼠伤寒沙门菌STM14_3199过表达菌株的构建及转录组测序分析

目的 通过转录组测序技术比较鼠伤寒沙门菌未知功能蛋白STM14_3199过表达菌株(WT_3199)和鼠伤寒沙门菌ATCC14028株(WT)各基因转录的差异,为进一步探究STM14_3199的功能提供方向.方法 PCR扩增STM14_3199基因,插入表达载体pBAD24,电转化至WT中,获得STM14_3199过表达菌株WT_3199,将其与WT在相同的营养条件下培养至对数生长期,制样后进行转录组测序分析.结果 经PCR、SDS-PAGE电泳及测序验证证明过表达菌株构建成功,对转录组数据进行质控显示样本组数据合格,统计结果中的差异基因,发现共有1 906个表达量出现差异的基因,其中上调887个,下调1 019个.将差异基因按照功能分类,并注释到GO及KEGG数据库中富集分析,发现这些差异基因涉及许多通路,影响体内多种功能的发挥.结论 成功构建了 STM14_3199过表达菌株WT_3199.WT_3199中表达量上调的基因主要集中在碳源利用、精氨酸的降解及合成等途径,部分下调基因在柠檬酸盐的利用以及精氨酸的分解代谢过程中发挥功能.GO富集分析表明差异基因主要与代谢过程、胞内组分以及一些酶的催化活性等有关,KEGG富集分析表明差异基因主要富集在与碳代谢、氧化磷酸化和三羧酸循环等相关通路中.这些分析均提示我们STM14_3199可能在这些通路中发挥作用,为进一步研究其功能奠定了基础.