小反刍兽疫病毒西藏株血凝素蛋白和融合蛋白兔多克隆抗体的制备与初步应用

目的 对小反刍兽疫病毒(Peste des petits ruminants Virus,PPRV)强毒株 China/Tibet/Geg/07-30 血凝素蛋白H和融合蛋白F的主要抗原表位区进行原核表达,并制备兔抗PPRV H和F蛋白多克隆抗体.方法 根据Gen-Bank上公布的PPRV China/Tibet/Geg/07-30(GenBank FJ905304.1)株H和F蛋白的基因序列构建重组质粒pET30a(+)-H和PGEX-4T-1-F,并将重组质粒转化至宿主菌E.coliBL21(DE3)感受态,IPTG诱导表达目的蛋白,经亲和层析纯化后与弗氏佐剂混合免疫新西兰大白兔,收集血清,制备多克隆抗体,利用间接免疫荧光(IFA)方法和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗体与抗原的结合能力.结果 分别对重组质粒进行酶切,pET30a(+)-H切出约1 653 bp的PPRV H基因,PGEX-4T-1-F切出约为1 245 bp的PPRV F基因,与预期一致.经IPTG诱导后重组蛋白以包涵体的形式表达,Western blot检测原核表达的两个目的蛋白均能与标签抗体发生反应,ELISA检测原核蛋白抗原能与相应多克隆抗体相结合,间接免疫荧光试验显示兔多克隆抗体能够识别表达PPRV H蛋白的重组狂犬病病毒(rSRV9-H)和表达PPRV F蛋白的重组狂犬病病毒(rSRV9-F).结论 利用原核表达系统成功表达出具有抗原性的PPRV China/Ti-bet/Geg/07-30株F和H蛋白,并制备了高特异的兔多克隆抗体,为建立针对PPRV H、F蛋白抗原的鉴定及亚单位疫苗的研究奠定了基础.