长链非编码RNA-B230352I09表达改变对H9C2心肌细胞增殖及周期的影响

目的·探讨长链非编码RNA-B230352I09(long non-coding RNA-B230352I09,lncRNA-B230352I09)表达改变对H9C2心肌细胞增殖及周期的影响.方法·构建lncRNA-B230352I09过表达载体(pcDNA-B230352I09)和阴性对照(negative control,NC)载体(pcDNA-NC),借助阳离子脂质体Lipofectamine 3000(Lipo3000)转染液将上述构建的载体转染至H9C2心肌细胞.实验分为空白对照组、阴性对照组、lncRNA-B230352I09过表达组,分别通过实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RT-PCR)检测 lncRNA-B230352I09 的表达量,验证其转染效率;细胞计数试剂盒8(cell counting kit-8,CCK8)检测H9C2心肌细胞在450 nm波长的吸光度(optical density,OD)并绘制生长曲线;5-乙炔基-2'-脱氧尿嘧啶(5-ethynyl-2'-deoxyuridine,EdU)标记增殖期H9C2心肌细胞并通过荧光显微镜观察增殖心肌细胞的数量;流式细胞术分析H9C2心肌细胞在不同细胞周期所占比例;RT-PCR检测H9C2细胞周期相关调控基因的表达情况.结果·与阴性对照组比较,lncRNA-B230352I09过表达组中lncRNA-B230352I09的表达水平显著升高(P=0.000),提示lncRNA-B230352I09转染H9C2心肌细胞模型构建成功.CCK8实验显示,与阴性对照组相比,lncRNA-B230352I09过表达可显著提高H9C2心肌细胞的OD值,促进H9C2心肌细胞增殖,表现为明显的时间依赖性细胞增殖能力增强(24 h:P=0.000;48 h:P=0.000;72 h:P=0.001);荧光显微镜观察发现,与阴性对照组相比,lncRNA-B230352I09过表达组中EdU标记阳性的H9C2心肌细胞比例明显增多;流式细胞术分析显示,和阴性对照组比较,lncRNA-B230352I09过表达组中处于S期的H9C2心肌细胞比例明显增加,G1期心肌细胞的比例下降(P=0.000);RT-PCR检测结果显示,与阴性对照组比较,lncRNA-B230352I09过表达组中H9C2心肌细胞周期蛋白D1(cyclinDl)和细胞周期蛋白依赖性激酶 1(cyclin dependent protein kinase 1,CDK1)的 mRNA表达水平显著升高(P=0.000).结论·lncRNA-B230352I09通过调节cyclin D1和CDK1促进心肌细胞进入S期,增强H9C2心肌细胞增殖能力.