原代大鼠骨髓来源内皮祖细胞培养方法改进及其生物学特性研究

目的 探究一种改良的内皮祖细胞(EPCs)分离培养鉴定方法.除应用传统密度梯度离心法与差速贴壁法分离细胞外,还融合集落挑选法增加所培养EPCs纯度,并观察其生物学特性.方法 密度梯度离心法分离出大鼠骨髓单个核细胞,结合差速贴壁法以及改良后新增的集落挑选法,在培养过程中不断纯化EPCs.通过吞噬试验,免疫荧光检测,流式细胞术鉴定,增殖实验,活力检测,迁移试验和体外成管实验多方面鉴定EPCs.结果 经过改良方法培养的EPCs早期呈现出纺锤形,晚期出现典型的铺路石样集落.(95.7±3.8)％具有吞噬Dil-acLDL和结合FITC-UEA-I能力.免疫荧光发现vWF阳性表达率(96.8±2.8)％,VE-cadherin阳性表达率(97.1±1.4)％.流式结果显示,一次,两次及三次纯化后CD34+和VEGFR2+细胞比例分别为(73.4±2.8)％,(76.8±3.1)％,(80.1±3.4)％,明显高于未纯化细胞(P<0.01).1×105个/ml细胞浓度其增殖和活力最好(P<0.01),并应用于后续实验.所培养细胞具有迁移能力及体外成管能力.结论 此方法操作简单,培养出的EPCs纯度高,状态好,功能完整.为修复受损管壁及治疗缺血相关性疾病提供足够数量以及纯度的细胞基础.