Si-GATA-3对AR小鼠PBMCs中Th1/Th2细胞亚群功能的体外调节

目的 研究RNAi介导的GATA-3基因慢病毒载体si-GATA-3在体外对变应性鼻炎(allergic rhinitis,AR)小鼠PBMCs中Th2、Th1细胞亚群功能的调节作用.方法 构建RNAi介导的GATA-3基因慢病毒载体si-GATA-3,并进行包装、纯化和滴定.BALB/C小鼠随机分为AR组和正常对照组.用卵蛋白构建BALB/C小鼠变应性鼻炎模型,抽取其外周血并分离外周血中单个核细胞(PBMCs),随机分为3组,即si-GATA-3组、si-NC组和AR组.进行细胞培养,然后分别用si-GATA-3、si-NC和生理盐水对3组变应性鼻炎小鼠的PBMCs进行干预72 h,用生理盐水代替si-GATA-3干预正常对照组小鼠的PBMCs.干预结束分离PBMCs和细胞培养上清液.分别用荧光定量qPCR和Western bloting方法检测PBMCs中GATA-3 mRNA、T-bet mRNA和GATA-3、T-bet蛋白的相对表达量;用ELISA技术检测细胞培养上清液中IL-4和IFN-γ的含量.结果 构建出RNAi介导的GATA-3基因慢病毒载体si-GATA-3,其滴度为5×108 TU/mL.制备出BALB/C小鼠的AR模型.Si-GATA-3组PBMCs中GATA-3 mRNA、GATA-3蛋白的相对表达量和上清液中IL-4的含量均明显低于AR组和si-NC组的表达量(P＜0.01),AR组和si-NC组中3者的表达量均明显高于正常对照组(P＜0.01);AR组3者表达量和si-NC组无差异(P＞0.05).si-GATA-3组PBMCs中T-bet mRNA及其蛋白的相对表达量明显高于AR组和si-NC组的表达量(P＜0.01),AR组和si-NC组中二者的表达量均明显低于对照组(P＜0.01);AR组的二者表达量和si-NC组无差异(P＞0.05).但si-GATA-3组细胞培养上清液中IFN-γ的含量高于正常对照组(P＜0.05),AR组与si-NC组中IFN-γ 明显高于正常对照组和si-GATA-3组(P＜0.01);AR组与si-NC组之间IFN-γ 的表达,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 si-GATA-3能有效的下调Th2细胞中GATA-3 mRNA、GATA-3蛋白和IL-4的表达,并上调Th1细胞中T-bet mRNA和T-bet蛋白的表达,体外能有效地纠正小鼠AR模型中PBMCs中Th2/Th1的免疫失衡.