夹心ELISA检测新冠病毒及其抗原方法的建立和验证

研究制备了快速检测新冠病毒(severe?acute?respiratory?syndrome?coronavirus?2,SARS-CoV-2)及其表面刺突糖蛋白受体结合域(receptor-binding?domain,RBD)的ELISA试剂盒.?该试剂盒由一对RBD单克隆抗体作为捕获抗体与检测抗体,其中检测抗体进行辣根过氧化物酶(HRP)偶联,通过方阵滴定法确定双抗夹心ELISA的最适工作条件.?另外,对检测试剂盒进行线性、特异性、准确度、精密度等进行了验证.?结果表明,双抗夹心ELISA方法中捕获抗体和酶标检测抗体的效价分别为1:160000和1:320000,试剂盒的定量检测下限为31?ng/mL.?经验证,组装的试剂盒精密度为0.71％～1.59％,平均准确度为96.53％,与其他的同种属灭活病毒无交叉反应.?试剂盒各项参数均符合《中国药典》(三部)2020版标准,表明该试剂盒适用于新冠病毒以及RBD抗原的快速检测.