防龋基因疫苗pVAX1-GbpA/GBD缓释温敏型水凝胶不同途径免疫兔的效果研究

目的:比较不同免疫途径下防龋疫苗pVAX1-GbpA/GBD聚乳酸乙醇酸-聚乙二醇-聚乳酸乙醇酸(PLGA-PEG-PLGA)水凝胶免疫兔后的免疫效应.方法:将重组质粒pVAX1-GbpA/GBD与空载体质粒pVAX1分别与PLGA-PEG-PLGA水凝胶震荡混匀.28只兔子随机分为7组:股四头肌注射疫苗组、口服疫苗组、鼻腔滴注疫苗组和颌下腺区皮下注射疫苗组、阴性对照组1股四头肌注射空载质粒pVAX1的水凝胶组、阴性对照组2口服空载质粒pVAX1的水凝胶组、空白对照组股四头肌注射生理盐水组.相同剂量进行3次免疫,第1次免疫1周后进行第2次免疫,2周后第3次免疫.采用酶联免疫吸附试验检测免疫前后唾液中和血清中的特异性IgA和IgG型抗GTF抗体水平.免疫组织化学法观察注射部位pVAX1-GbpA/GBD蛋白的阳性表达.结果:(1)防龋基因疫苗pVAX1-GbpA/GBD水凝胶经不同途径免疫兔后,免疫后2周4组防龋基因疫苗组的唾液中特异性IgA抗体和IgG抗体水平显著升高(P<0.05);IgA型抗GTF抗体水平在第6周达到最高,口服组在第4周IgA型抗GTF抗体水平高于其它6组;颌下腺注射组在第6、10周IgA型抗GTF抗体水平高于其它6组;口服组与颌下腺注射组在第8、12周IgA型抗GTF抗体水平高于其它组(P<0.05),但两者之间比较差异无统计学意义(P>0.05).(2)免疫后2周4组防龋基因疫苗组的血清中特异性IgA抗体和IgG抗体水平显著升高(P<0.05);IgG型抗GTF抗体水平在第8周达到最高,口服组在第3、6、10周IgG型抗GTF抗体水平高于其它6组(P<0.05);颌下腺注射组在第4、8周IgG型抗GTF抗体水平高于其它6组(P<0.05).(3)免疫组织化学染色结果显示4组防龋基因疫苗组的免疫部位可见pVAX1-GbpA/GBD目的蛋白的阳性表达,口服疫苗组的小肠黏膜部位的上皮细胞胞浆和颌下腺注射组的导管区域的细胞胞浆内中pVAX1-GbpA/GBD蛋白染色明显,表达强烈.结论:防龋基因疫苗pVAX1-GbpA/GBD水凝胶经4种途径免疫兔后均能诱导兔机体产生有效的免疫反应且维持较长时间,其中口服组与颌下腺注射组诱导的抗体水平更佳.