生殖细胞条件性敲除Usp16基因小鼠的建立、鉴定及表型分析

目的 建立生殖细胞特异性敲除去泛素化酶Usp16小鼠,并分析其生殖表型,探究Usp16是否在精子发生过程发挥功能.方法 首先,将Vasa-cre转基因小鼠与Usp16条件性小鼠(Usp16flox/flox)杂交获得生殖细胞特异性敲除Usp16小鼠;其次,利用qPCR、Western Blot和免疫荧光检测睾丸中Usp16表达;并通过合笼交配、计算机辅助精子分析和HE染色法进行生殖表型分析.结果 成功获得了生殖细胞特异性敲除Usp16纯合子(Usp16flox/flox/Vasa-cre+),及杂合子小鼠(Usp16flox/wt/Vasa-cre+).与野生型相比,Usp16flox/wt/Vasa-cre+雄鼠生殖表型没有显著性变化,但与纯合子雄鼠交配的雌鼠受孕率仅为7％,精子数量减少约79％,活力下降约87％,精子畸形率高达83％,睾丸曲细精管中出现多核细胞,附睾中早熟精子数增多了约3倍.结论 小鼠睾丸内生殖细胞Usp16纯合敲除会严重降低精子质量,从而降低雄性生育能力.