miR-520f-3p靶向MCL1抑制结肠癌细胞生长及移植瘤发生

目的 探讨miR-520f-3p对结肠癌细胞生长及移植瘤发展的作用及机制.方法 实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测结肠癌组织和细胞中miR-520f-3p的mRNA表达.将miR-NC、miR-520f-3p mimic、miR-520f-3p inhibitor质粒分别转染进入HT-29细胞,克隆形成实验检测细胞增殖能力,流式检测细胞凋亡率,Western印迹检测Ki67、增殖细胞核抗原(PCNA)、cleaved caspase-3、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达水平.将裸鼠分为Control组、miR-NC组、miR-520f-3p mimic组、miR-520f-3p inhibitor组,在每只裸鼠左腋下皮下注射各转染的结肠癌HT-29细胞,30 d后处死.观察移植瘤体积并测定其重量,TUNEL检测细胞凋亡率,免疫组化检测Ki67阳性表达水平,Western印迹检测Ki67、PCNA、caspase-3、Bax和Bcl-2蛋白表达水平.双荧光素酶报告检测靶向关系,Western印迹检测髓样细胞白血病蛋白(MCL)1蛋白表达水平.将miR-520f-3p mimic与pc-NC或pc-MCL1质粒联合转染进入HT-29细胞,克隆形成实验检测细胞生长能力,流式检测细胞凋亡率,Western印迹检测Ki67、PCNA、cleaved caspase-3、Bax、Bcl-2蛋白表达水平.结果 与正常结肠组织和细胞相比,结肠癌组织和细胞中miR-520f-3p mRNA表达显著下调(P<0.01),选取HT-29细胞做后续实验.与Control组相比,miR-520f-3p mimic组HT-29克隆细胞数目显著减少,细胞凋亡率显著增加,Ki67和PCNA蛋白表达水平显著下调,cleaved caspase-3和Bax/Bcl-2蛋白表达水平显著上调(均P<0.01);miR-520f-3p inhibitor组HT-29克隆细胞数目显著增加,细胞凋亡率显著减少,Ki67和PCNA蛋白表达水平显著上调,cleaved caspase-3和Bax/Bcl-2蛋白表达水平显著下调(均P<0.01).与Control组相比,miR-520f-3p mimic组HT-29移植瘤重量和体积显著减少,细胞凋亡率显著增加,Ki67和PCNA蛋白表达水平显著下调,cleaved caspase-3和Bax/Bcl-2蛋白表达水平显著上调(均P<0.01);miR-520f-3p inhibitor组HT-29移植瘤重量、体积及Ki67阳性细胞百分率显著增加,细胞凋亡率显著减少,Ki67和PCNA蛋白表达水平显著上调,cleaved caspase-3和Bax/Bcl-2蛋白表达水平显著下调(均P<0.01).miR-520f-3p靶向下调MCL1.过表达MCL1逆转miR-520f-3p过表达对HT-29细胞增殖和凋亡的作用(均P<0.01).结论 miR-520f-3p通过靶向下调MCL1来抑制结肠癌细胞生长及移植瘤的发展.