雌激素对骨骼肌成肌细胞增殖、分化及迁移的影响

目的 探讨不同浓度雌激素对骨骼肌成肌细胞增殖、分化及迁移的影响及机制.方法 培养小鼠骨骼肌成肌细胞,分别给予17β-雌二醇(E2)10-9、10-8、10-7、10-6 mol/L及E210-8 mol/L+雌激素受体拮抗剂ICI182,780处理.Western印迹检测成肌细胞中ERα和ERβ表达情况;分别培养1、2、3、4、5 d,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖情况.培养48 h后,采用Transwell法检测细胞迁移.给予4％马血清(HS)诱导分化培养4 d,荧光显微镜下观察各组细胞肌管形成,通过免疫荧光化学法和Western印迹检测各组细胞中肌球蛋白重链(MYHC)及肌细胞生成蛋白(MyoG)基因的表达.结果 随着E2浓度升高ERα表达也随之升高,当E2浓度为10-6 mol/L时,其表达量达最高值(P<0.05),且10-7 mol/L和10-6 mol/L E2组与对照组差异有统计学意义(P<0.05);而随着E2浓度升高,ERβ在C2C12表达量呈现出先升高再下降的趋势,在E2浓度为10-8 mol/L时表达量最高(P<0.05),与对照组差异有统计学意义.与对照组比较,第3天开始10-8 mol/L E2组细胞增殖显著高于对照组,且10-8 mol/L E2+ICI182,178组细胞增殖显著低于10-8 mol/L E2组(P<0.05).E2浓度≤10-8 mol/L时,细胞迁移随着E2浓度升高而增多;E2浓度>10-8 mol/L时,随着E2浓度升高,细胞迁移数逐渐下降,而给予E2受体拮抗剂ICI182,780处理后,迁移细胞数再次升高,但仍显著高于对照组且显著低于10-8 mol/L E2组(P<0.05).与对照组相比,不同浓度E2组肌管形成数均显著升高(P<0.05),在E2浓度>10-8 mol/L时MYHC表达及肌管形成数目均随着E2浓度升高而增多,但当E2浓度>10-8 mol/L时,却呈现逐渐下降的趋势,给予E2受体拮抗剂ICI182,780处理后,肌管形成数目均显著低于10-9 mol/L E2组(P<0.05).C2C12中MyoG的表达变化与MYHC变化规律一致,在E2浓度≤10-8 mol/L时MYHC和MyoG表达均随着E2浓度升高而增多,但当E2浓度>10-8 mol/L时,却均出现逐渐下降的趋势,10-8 mol/L组MYHC和MyoG的表达量与对照组差异有统计学意义(P<0.05).给予E2受体拮抗剂ICI182,780处理后,MyoG及MYHC水平均显著低于10-8 mol/L E2组(P<0.05).结论 E2能促进成肌细胞增值、分化及其肌管形成,其机制可能与ERα和ERβ表达变化及分化相关基因MyoG的表达有关.