铜绿假单胞菌信号分子3-O-C12-HSL与PPARγ-LBD的结合特性研究

目的 制备纯化的人过氧化物酶体增殖物激活受体-配体结合域(PPARγ-LBD)肽段并观察铜绿假单胞菌信号分子N-3-氧代十二烷酰-L-同型丝氨酸内酯(3-O-C12-HSL)与PPARγ-LBD的结合强度.方法 采用分子对接的方式预测3-O-C12-HSL与PPARγ的结合位点.合成PPARγ-LBD基因序列并插入pET28b质粒,鉴定后通过异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组肽段,进行十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及Western blot分析.表面等离子体共振技术检测3-O-C12-HSL与PPARγ-LBD的结合动力学参数.结果 分子对接结果显示3-O-C12-HSL与PPARγ-LBD区的Tyr473和Tyr327形成氢键,3-O-C12-HSL末端柔性碳链与PPARγ-LBD区的Met329、Leu330等残基形成疏水结合.制备获得人PPARγ-LBD肽段,经SDS-PAGE及Western blot检测在25～35 ku有一条蛋白的印迹,与PPARγ-LBD分子质量一致.3-O-C12-HSL与PPARγ结合的亲和力常数为1.65×10-4 mol/L,结合速率常数为1.06×102/ms,解离速率常数为1.75×10-2/s.结论 3-O-C12-HSL与PPARγ-LBD功能区结合能力强于PPARγ特异性拮抗剂GW9662,为制备针对3-O-C12-HSL的特异性靶向药物提供了实验依据.