缺氧环境下子宫内膜腺上皮细胞中微RNA表达谱及细胞凋亡变化

目的 探究缺氧环境下子宫内膜腺上皮细胞(endometrial glandular epithelial cell,EEC)中微RNA(micro-RNA,miRNA)表达谱变化及其对凋亡的影响.方法 取对数生长期EEC,接种至六孔板(1×105个细胞/孔)并随机分为缺氧组和对照组.缺氧组、对照组分别置于缺氧环境(O2:N2:CO2体积比为1:94:5)和正常氧环境(O2:CO2体积比为95:5)中培养.培养4 h后收集细胞,加入Trizol并提取总RNA.采用高通量测序法测定两组EEC中miRNA表达谱变化,采用实时荧光定量PCR(realtime fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RT-PCR)法检测miR-7704、miR-7974基因表达水平,采用流式细胞术检测EEC凋亡情况,采用蛋白印迹法(Western blot)检测p53和凋亡相关蛋白表达变化.结果 高通量测序对21种常见miRNA表达水平检测后发现,与对照组比较,缺氧组EEC中16种miRNA表达上调,5种miRNA表达下调;其中对照组表达丰度较高的miR-7704和miR-7974在缺氧组表达下降最为显著(P均<0.05).RT-PCR结果显示,与对照组比较,缺氧组EEC中miR-7704和miR-7974相对表达量分别降低20％、80％.流式细胞术检测结果显示,缺氧组早期凋亡率及晚期凋亡率均高于对照组(P均<0.001).Western blot检测结果显示,与对照组比较,缺氧组EEC中p53表达升高,抗凋亡蛋白B细胞淋巴瘤-2表达降低(P均<0.05).结论 缺氧环境可诱导EEC中miRNA表达谱改变,其中以miR-7974表达下调最为显著.p53可能是miR-7974的靶蛋白,缺氧诱发的EEC凋亡可能通过下调miR-7974水平而促进p53表达实现.