miR-449b对绵羊早期胚胎发育的影响

[目的]研究miR-449b对绵羊早期胚胎发育的影响.[方法]采用Percoll密度梯度离心法获得纯化绵羊精子,将绵羊卵丘-卵母细胞复合体(COCs)在培养箱中培养16～18 h获得成熟卵母细胞,从1月龄纯种萨福克绵羊耳组织分离成纤维细胞,通过实时荧光定量PCR比较绵羊精子、成熟卵母细胞与成纤维细胞中miR-449b的相对表达量;给成熟卵母细胞分别显微注射0.9％生理盐水(Con组)、miR-449b模拟物对照(NC mimic)与miR-449b模拟物(miR-449b mimic),注射后进行孤雌激活,分别于激活的第2、7天统计胚胎卵裂率与囊胚率;将成熟卵母细胞进行体外受精(IVF),收集IVF、Con、NC mimic与miR-449b mimic组2-细胞胚胎,采用免疫荧光法比较组蛋白H3K9me3的变化.[结果]miR-449b在精子中的表达显著高于成熟卵母细胞和成纤维细胞(P＜0.05);与Con组相比,miR-449b mimic和NC mimic组胚胎的卵裂率均显著降低(P＜0.05),NC mimic组胚胎卵裂率显著低于miR-449b mimic 组(P＜0,05);miR-449b mimic 组胚胎囊胚率提高,但差异不显著(P＞0.05);IVF、Con、NC mimic与miR-449b mimic组2-细胞胚胎均表达组蛋白H3K9me3,且都在细胞核表达.与Con组相比,NC mimic组2-细胞胚胎组蛋白H3K9me3的表达水平显著增加(P＜0.05),miR-449b mimic组显著降低(P＜0.05);NC mimic组2-细胞胚胎组蛋白H3K9me3的表达水平显著高于miR-449b mimic组(P＜0.05),miR-449b mimic与IVF组无显著差异(P＞0.05).[结论]miR-449b能显著提高绵羊早期胚胎的发育率,且降低早期胚胎中H3K9me3的表达水平.