银黑狐MC1R基因核心启动子区的鉴定

[目的]确定银黑狐黑素皮质激素受体1(melanocortin 1 receptor,MC1R)基因的核心启动子区,为探究该基因的表达调控机制提供理论依据.[方法]以银黑狐基因组DNA为模板,PCR扩增获得MC1R基因5'-UTR区序列,利用3个在线生物学软件综合预测MC1R基因启动子活性区;PCR扩增获得该基因5'-UTR区不同长度的缺失片段,并克隆至pMD19-T载体,将重组质粒转染至黑色素B16细胞中,利用双荧光素酶检测技术对10个缺失片段进行荧光素酶活性检测.[结果]成功获得银黑狐MC1R基因5'-UTR区序列,软件预测显示-596/+73 bp可能为启动子活性区.双荧光素酶活性检测发现,构建的10个缺失片段的荧光素酶表达载体均具有启动子活性,其中pGL3-MC1RP8(-520/+73 bp)有较强的活性,提示其为核心启动子区,与软件预测结果基本一致.[结论]试验确定了银黑狐MC1R基因的核心启动子区为-520/+73 bp,为深入研究该基因的毛色调控机制奠定了理论基础.