HER2靶向TRAC和B2M双基因敲除通用型CAR-T细胞的制备及对非小细胞肺癌细胞的杀伤作用

目的 利用同种异体健康人T细胞,制备靶向人表皮生长因子受体2(HER2)的通用型嵌合抗原受体T(CAR-T)细胞,检测其对HER2阳性肿瘤细胞的杀伤能力.方法 构建靶向HER2的人源化单链抗体P1h2 CAR慢病毒表达载体,包装慢病毒感染健康人T细胞获得CAR-T细胞;利用成簇的规律间隔的短回文重复序列/Cas9核酸酶(CRISPR/Cas9)技术敲除CAR-T的T细胞受体(TCR)和人类白细胞抗原Ⅰ(HLA-Ⅰ),制备靶向HER2的通用型CAR-T细胞,CCK-8试验检测其对HER2阳性肿瘤细胞的杀伤能力.结果 制备通用型CAR-T细胞,CAR阳性率为(67.1±1.46)％,TCR和HLA-Ⅰ类分子的敲除率为(86.31±1.78)％.体外杀伤试验显示通用型CAR-T细胞能够有效杀伤HER2阳性肿瘤细胞,其杀伤能力与CAR-T细胞无明显区别.结论 成功制备能够靶向杀伤HER2阳性肿瘤细胞的通用型CAR-T细胞,为实现应用通用型同种异体CAR-T细胞治疗HER2阳性肿瘤患者奠定了基础.