下调血管生成素样蛋白7表达对血管紧张素Ⅱ介导的血管平滑肌细胞炎症反应的影响

目的:探讨RNA干扰血管生成素样蛋白7 （Angptl7）基因对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的血管平滑肌细胞（VSMC）炎症因子的影响及其作用机制。方法:体外培养人VSMC，分为常规F12K培养基培养（对照）和1 μg/mL AngII培养24 h。VSMC用AngⅡ（1 μg/mL）处理24 h后，采用siRNA-Angptl7和阴性对照siRNA-NC在Lipofectamine 2000介导下转染VSMC。RT-qPCR检测mRNA表达水平；Griess反应测定一氧化氮（NO）含量；蛋白免疫印记法检测相关蛋白的改变；酶联免疫吸附法检测VSMC中炎症因子肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素-1β （IL-1β）和IL-6水平。多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验，两组间比较采用独立样本t检验。结果:与对照比较，1 μg/mL AngⅡ处理可促进VSMC中Angptl7 mRNA （0.97±0.06比3.05±0.21）和蛋白表达（1.01±0.12比1.61±0.14），亦可促进VSMC中IL-1β[（45.21±8.10）比（126.17±11.77） pg/mL]、IL-6[（50.50±7.51）比（108.50±9.51）pg/mL]和TNF-α的表达[（60.77±9.58）比（185.67±17.35）pg/mL]，差异有统计学意义（P均< 0.01）。与对照和转染siRNA-NC相比，转染siRNA-Angptl7下调Angptl7蛋白表达（0.99±0.12，0.98±0.12比0.44±0.14，P < 0.01）。与AngⅡ干预组相比，siRNA-Angptl7降低AngⅡ介导的VSMC炎症反应相关蛋白TNF-α、IL-6和IL-1β的表达，核因子κB （NF-κB）/诱导型一氧化氮合酶（iNOS）/环氧化酶2 （COX-2）信号通路相关蛋白NF-κB、iNOS和COX-2表达及NO含量亦降低，差异有统计学意义（P均< 0.01）。与siRNA-NC相比，siRNA-Angptl7组AngⅡ诱导的VSMC炎症反应相关蛋白TNF-α （0.99±0.13比0.51±0.12）、IL-6 （1.00±0.12比0.38±0.05）和IL-1β的表达（0.99±0.14比0.48±0.11），NF-κB （1.00±0.10比0.42±0.08）、iNOS （1.02±0.12比0.42±0.10）和COX-2表达（1.00±0.11比0.52±0.12）均降低，NO含量[（54.78±2.76）比（18.08±3.61）μmol/L]亦降低，差异有统计学意义（P均< 0.01）。结论:AngⅡ可通过Angptl7促进VSMC炎症反应，下调Angptl7蛋白表达可以抑制VSMC的炎症反应，其作用机制可能与抑制NF-κB/iNOS-COX-2信号通路有关。