LncFAM200B对牦牛肌内前体脂肪细胞脂质沉积的影响

[目的]拟通过腺病毒介导的超表达及siRNA干扰试验,分析lncFAM200B对牦牛肌内脂肪细胞脂质沉积的影响,为解析lncFAM200B对牦牛肌内脂肪细胞脂质沉积的调控机制奠定基础.[方法]采集牦牛背最长肌组织,采用酶消化法和差速贴壁法分离牦牛肌内前体脂肪细胞;构建包装lncFAM200B超表达腺病毒,设计合成其siRNA干扰序列;通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分析lncFAM200B超表达与干扰后脂肪分化标志基因PPAR γ、C/EBPα、AP2,lncFAM200B潜在靶基因SIRT1、PTEN的表达水平;采用油红0染色、甘油三酯(TAG)测定、CCK-8检测等方法检测细胞内脂滴沉积情况、甘油三酯含量变化及细胞增殖情况.[结果]从牦牛背最长肌成功分离获得肌内前体脂肪细胞;lncFAM200B超表达后,脂肪分化标志基因C/EBPα、AP2表达量显著升高(P＜0.05),随着诱导分化时间的增加,lncFAM200B潜在靶基因SIRT1表达量呈先降低后升高的趋势,PTEN表达量呈现先增高后降低趋势;细胞脂滴沉积显著增加(P＜0.05),且胞内形成较大脂滴;超表达4 d后,细胞内甘油三酯含量显著增加(P＜0.05).干扰lncFAM200B可显著降低脂肪分化标志基因PPARy.C/EBPα、AP2的表达水平(P＜0.05),降低细胞脂肪沉积,且诱导分化第6天细胞内甘油三酯含量显著降低(P＜0.05);干扰lncFAM200B后其潜在靶基因SIRT1呈现先升高后降低的表达趋势,PTEN则相反.CCK-8增殖实验表明,lncFAM200B超表达72h后,细胞增殖效率显著降低(P＜0.05),而干扰lncFAM200B后72 h后细胞增殖效率显著增强(P＜0.05).[结论]lncFAM200B可能通过影响脂肪分化标志基因C/EBPα和AP2,脂肪合成相关基因SIRT1和PTEN的表达从而影响牦牛肌内脂肪沉积,但其具体机制还需要进一步研究.