丹参酮ⅡA通过半乳糖凝集素-3抑制心肌重塑的机制研究

目的 分析丹参酮ⅡA对缺血/再灌注(I/R)所致心力衰竭(心衰)模型大鼠心肌重构的影响.方法 ①?体内实验:将30只健康雄性SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、心衰模型组和丹参酮ⅡA组,每组10只.采用结扎大鼠左冠状动脉(冠脉)待心电监护出现明显ST段抬高30?min后放松结扎线进行再灌注2?h来制备I/R后心衰模型;假手术组于同期开胸,仅丝线绕过左冠脉而不结扎.丹参酮ⅡA组术后3?d开始腹腔注射丹参酮ⅡA?10?mg/kg,连续用药9周;其他两组于同期腹腔注射等量生理盐水.干预9周后观察各组大鼠的行为学表现,检测血流动力学相关指标.处死大鼠取心脏组织,Masson染色后光镜下观察心肌组织纤维化程度;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测半乳糖凝集素-3(Galectin-3)含量;采用荧光定量反转录-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)?的mRNA表达;采用蛋白质免疫印迹试验(Western?blotting)检测MMP-2和TIMP-1的蛋白表达.②?体外实验:提取并分离大鼠的原代心肌成纤维细胞,分为空白对照组、血管紧张素Ⅱ组(给予7～10?mmol/L血管紧张素Ⅱ)和血管紧张素Ⅱ+丹参酮ⅡA组(同时给予7～10?mmol/L血管紧张素Ⅱ+?5～10?mmol/L丹参酮ⅡA).分别于培养24?h和48?h时,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测细胞吸光度(A)值并计算细胞增殖率;采用qRT-PCR法检测Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、MMP-2和TIMP-1的mRNA表达;采用ELISA法检测Galectin-3含量.结果 ①?体内实验:大鼠活动状态、毛发顺帖程度及进食量由好到差依次为假手术组、丹参酮ⅡA组和心衰模型组.与假手术组相比,心衰模型组大鼠心率(HR)明显下降、心功能明显受损,Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、TIMP-1的mRNA和蛋白表达及Galectin-3含量均明显升高,MMP-2的mRNA和蛋白表达均明显降低.与心衰模型组相比,丹参酮ⅡA组大鼠HR明显升高、心功能明显改善,Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原的mRNA表达均明显降低,TIMP-1的mRNA和蛋白表达及Galectin-3含量均明显降低,MMP-2的mRNA和蛋白表达均明显升高,以制模9周变化最为明显〔Ⅰ型胶原mRNA(2-ΔΔCt):4.70±1.19比10.21±1.62,Ⅲ型胶原mRNA(2-ΔΔCt):3.03±0.46比13.84±1.93,TIMP-1?mRNA(2-ΔΔCt):1.90±0.19比4.55±0.43,TIMP-1/GAPDH:0.33±0.04比0.67±0.05,Galectin-3(ng/L):489.93±79.30比821.72±94.09,MMP-2?mRNA(2-ΔΔCt):0.37±0.07比0.03±0.01,?MMP-2/GAPDH:0.69±0.09比0.21±0.04,均P<0.05〕.Masson染色显示,心衰模型组大鼠心肌组织出现明显纤维化,而丹参酮ⅡA干预能够改善大鼠心肌组织的纤维化.②?体外实验:与空白对照组相比,血管紧张素Ⅱ组培养24?h和48?h心肌成纤维细胞增殖率、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和TIMP-1表达及Galectin-3含量均明显升高,MMP-2表达明显降低.与血管紧张素Ⅱ组相比,血管紧张素Ⅱ+丹参酮ⅡA组心肌成纤维细胞增殖率及Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和TIMP-1表达及Galectin-3含量均明显降低,MMP-2?mRNA表达明显升高,以培养48?h改变最明显〔细胞增殖率:(57.0±3.7)％比(67.0±2.4)％,Ⅰ型胶原mRNA(2-ΔΔCt):551.43±67.10比871.48±12.25,Ⅲ型胶原mRNA(2-ΔΔCt):233.76±18.73比385.51±31.35,TIMP-1?mRNA(2-ΔΔCt):238.69±17.37比351.84±26.17,?Galectin-3(ng/L):283.76±28.73比415.51±31.35,MMP-2?mRNA(2-ΔΔCt):108.54±12.10比51.47±6.25,均P<0.05].结论 丹参酮ⅡA可以改善I/R后心衰大鼠的心功能,抑制心肌纤维化,改善心衰大鼠的心肌重构.