绵羊附睾GPX5的抗氧化功能研究

[目的]利用体外培养的绵羊附睾上皮细胞(EECs)探究谷胱甘肽过氧化物酶5(GPX5)的抗氧化功能.[方法]体外分离培养并鉴定绵羊EECs后备用.筛选合成3条GPX5的siRNA序列(siRNA-N.1、siRNA-N.2、siRNA-N.3),同时随机设计一段不与GPX5重合的扰码(scramble)序列(siRNA-NC),采用瞬时转染法转染EECs,以正常的EECs为对照(CK),于转染34 h后取样,从mRNA和蛋白水平检测GPX5的干扰效果.采用CCK-8法检测GPX5干扰组、siRNA-NC组和CK组EECs的增殖能力,采用DCFH-DA探针法检测其活性氧(ROS)水平,采用TBA法检测其丙二醛(MDA)水平,采用免疫荧光法检测其8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)水平.[结果]分离培养的细胞可与角蛋白18(CK18)特异性抗体反应,表明细胞为EECs,可用于后续试验.siRNA-N.3(即siRNA-GPX5)对EECs GPX5 mRNA和蛋白表达的干扰效果最优,可用于后续试验.随着过氧化氢(H2O2)处理浓度的增加,与CK组相比,siRNA-GPX5组EECs的增殖能力持续下降.与CK组相比,siRNA-GPX5组EECs中的ROS和MDA水平分别极显著(P＜0.01)和显著(P＜0.05)升高,8-OHdG水平明显上升.[结论]GPX5可以有效保护绵羊EECs,使其免受脂质过氧化损伤及DNA氧化损伤.