血液病毒组学样本制备方法的建立

目的 建立切实有效的血液病毒组学样本制备方法.方法 通过比较6个稀释梯度超离心病毒实验富集病毒效果,比较ACK红细胞裂解法和Ficoll密度梯度离心法制备白细胞的效果,使用DNase、RNase和Nuclease混合体系去除宿主核酸干扰,探索有效的实验方案和流程.使用HBV阳性血浆和HIV阳性血浆验证本研究建立的血液病毒组学样本制备方法的可行性.结果 超离心全血对HBV的富集效果不理想,超离心血浆对HBV的富集效果好,回收率最低为41.0％,最高达到100.0％.ACK红细胞裂解法比Ficoll密度梯度离心法得到的白细胞更全面(12.36 x 109/L比5.45 x 109/L),且操作更为简单易行.使用DNase、RNase和Nuclease混合体系对样本进行消化处理,可明显降低宿主信息的干扰,将病毒reads数与总reads数的比例从＜0.01％提升到4.56％.建立、优化了血液病毒组学样本制备的技术方法,并验证了该方法的可行性.结论 通过摸索血液病毒组学样本制备的实验流程和实验条件,克服了血液病毒组学样本制备过程中的一系列技术难点,初步建立了可实用的技术操作体系,为血液病毒组学的应用奠定了基础.