绵羊肺炎支原体P113蛋白C末端基因真核表达载体的构建及其小鼠免疫应答

为探究绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,Mo)P1 13蛋白小鼠免疫应答情况.构建了 Mo P1 13蛋白C末端基因pVAX1-P113表达质粒,转染至MDBK细胞,应用PCR技术及间接免疫荧光试验评价其体外表达效果;免疫实验动物BALB/c小鼠,通过间接ELISA方法分析重组质粒诱导小鼠特异性抗体和细胞因子(IL-2、IL-4和IFN-γ)分泌情况.结果显示,成功构建含MoP113基因重组真核表达质粒pVAX1-P113,重组质粒转染MDBK细胞能有效转录并表达目的蛋白;小鼠免疫试验结果显示重组质粒pVAX1-P113免疫小鼠后血清特异性抗体水平显著升高,在免疫7周时血清特异性抗体仍为阳性;血清中IL-2、IL-4和IFN-y的分泌水平显著升高,并在时间上呈先上升后下降的趋势;在不同试验组之间特异性抗体、IL-2、IL-4和IFN-y的分泌量也存在显著性差异,pVAX1-P113(100 μg)组分泌水平显著高于其他试验组.结果表明,重组质粒pVAX1-P113能诱导免疫小鼠产生免疫应答;为羊支原体肺炎(MPSG)核酸疫苗研究与应用提供了依据.