针对RhD血型抗原的单链寡核苷酸适配体修饰红细胞毒性的初步研究

目的 探讨RhD血型抗原的单链寡核苷酸(ssDNA)适配体对红细胞毒性的影响.方法 通过基因合成得到的2条全长82 bp ssDNA的RhD血型抗原适配体;收集5份EDTA抗凝全血,分别制备成4×107/mL的悬浮红细胞,均分为10管,各5管(100 μL/管)标记为实验组:加入2条单特异性ssDNA全长序列(100 pmol/μL)各5 μL;对照组:加入等量生理盐水.2组在37℃孵育洗涤60 min后,在LISS液中重悬,于4℃贮存.根据贮存时间不同将实验组和对照组进一步分为1 h、1 d、3 d、10 d、17 d共5个组(每组重复5个血液标本);以FITC标记的Annexin V作为探针标记不同贮存时间LISS悬液中红细胞的磷脂酰丝氨酸(PS),以Fluo-4标记不同贮存时间LISS悬液中红细胞的Ca2+.分别通过流式细胞仪检测不同保存时间LISS悬液中红细胞PS的外翻情况以及红细胞中Ca2+的变化.结果 光学显微镜镜检:孵育后的实验组未发生凝集,对照组发生凝集.流式细胞仪检测:2组间相同贮存时间悬浮红细胞的Annexin V-FITC染色细胞数相近(P＞0.05);实验组Annexin V细胞凋亡率(％):贮存10 d时为6.06±1.38,明显高于贮存1 h(P＜0.05),贮存17 d时为7.77±1.23,明显高于贮存1 h、1 d、3 d(P＜0.05).2组间在相同贮存时间悬浮红细胞Fluo-4 AM细胞凋亡率相近(P＞0.05);实验组Fluo-4 AM细胞凋亡率(％)贮存3 d、10 d、17 d分别为20.84±4.16、22.35±3.37、27.06±2.81(P＜0.05).结论 未发现ssDNA适配体对红细胞存在细胞毒性影响;RhD ss-DNA适配体或有望成为检测及制备通用血的材料.