小续命汤对脑出血小鼠脑组织中线粒体凋亡和自噬的影响

目的:探讨小续命汤对脑出血(ICH)小鼠脑组织中线粒体介导的细胞凋亡和自噬的作用及机制.方法:健康雄性C57BL/6小鼠随机分为4组(n=12):假手术组、ICH组、小续命汤治疗组、小续命汤对照组.向ICH组和小续命汤治疗组小鼠右侧纹状体内注入30μL自体非抗凝血,建立ICH模型.假手术组和小续命汤对照组采用同样的操作过程,但不注入血液.模型建立后,小续命汤治疗组和小续命汤对照组给予小续命汤水煎液,连续灌胃1周后,收集脑组织标本.原位末端标记法(TUNEL)用于观察细胞凋亡情况;免疫组织化学检测用于观察线粒体凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、活化的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(cleaved-caspase-3)和线粒体自噬相关蛋白Beclin-1、微管相关轻链蛋白3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)、Parkin、PINK-1的表达情况;Western blot用于检测Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)、NF-κB和p-NF-κB蛋白的表达情况.结果:与假手术组比较,ICH组TUNEL结果显示小鼠血肿周围脑组织中TUNEL阳性细胞数量显著增多(P<0.001),免疫组织化学检测结果显示Bax、cleaved-caspase-3、PINK-1表达显著上调(P<0.05),Bcl-2和Bcl-2/Bax比值显著下降(P<0.01),Western blot结果显示TLR4、MyD88、NF-κB和p-NF-κB蛋白表达显著上调(P<0.05,P<0.01).与ICH组比较,小续命汤治疗组TUNEL结果显示血肿周围脑组织中TUNEL阳性细胞的数量显著减少(P<0.01),免疫组织化学检测结果显示Bax、cleaved-caspase-3蛋白表达水平显著下降(P<0.05),Bcl-2、Bcl-2/Bax比值、Beclin-1、LC3-Ⅱ、Parkin和PINK-1表达水平显著上调(P<0.05,P<0.001).Western blot结果显示TLR4、MyD88、NF-κB和p-NF-κB蛋白表达水平显著下降(P<0.05,P<0.01).结论:小续命汤通过TLR4/MyD88/NF-κB信号通路抑制ICH小鼠脑组织中的线粒体凋亡并促进线粒体自噬.