丹酚酸B通过调控Cx43抑制铁死亡对心肌梗死大鼠模型的保护机制研究

目的:基于铁死亡探讨丹酚酸B(Sal B)对心肌梗死(MI)大鼠模型的保护作用,并分析缝隙连接蛋白43(Cx43)在其中的作用.方法:经结扎左冠状动脉法构建MI大鼠模型,随机分组为假手术(sham)组、MI组、Sal B组、Sal B+AAV9-GFP组、Sal B+AAV9-GFP-Cx43-siRNA组和Sal B+AAV9-GFP-Cx43-siRNA+铁死亡抑制剂ferro?statin-1(Fer-1)组,造模2 d后给予相应处理.4周后,HE染色和Perl blue染色分别观察心肌形态和铁累积;免疫荧光染色观察Cx43在心肌中分布;透射电镜观察心肌超微结构;试剂盒检测血清肌酸激酶MB(CK-MB)、心肌钙蛋白I(cTnI)和乳酸脱氢酶(LDH)水平,以及心肌丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)、谷胱甘肽(GSH)和铁含量;Western blot检测心肌p-Cx43和Cx43蛋白水平.结果:相较于sham组,MI组心肌纤维出现坏死、断裂,排列紊乱,心肌线粒体出现损伤,Cx43蛋白在心肌细胞侧侧连接处弥散分布,血清CK-MB、cTnI和LDH水平,以及心肌MDA、ROS、铁离子含量及Perl blue阳性面积均增加(P<0.05),心肌GSH、p-Cx43和Cx43水平均降低(P<0.05).Sal B治疗后心肌损伤明显缓解,心肌闰盘内Cx43蛋白增加,血清CK-MB、cTnI和LDH水平,以及心肌MDA、ROS、铁离子含量及Perl blue阳性面积均降低(P<0.05),心肌GSH、p-Cx43和Cx43水平均升高(P<0.05).AAV9-GFP-Cx43-siRNA能减弱Sal B的上述保护作用,且这种减弱作用可被Fer-1抑制.结论:Sal B通过上调Cx43蛋白表达及磷酸化,改善其在心肌中分布,抵抗细胞铁死亡,从而对MI大鼠的心脏进行保护.