野生型及突变型人Toll样受体2 3'非编码区基因重组质粒的构建及鉴定

目的 构建野生型及突变型人Toll样受体2(Toll-like receptor 2,TLR2)3'非编码区(3'UTR)基因重组质粒,并进行鉴定.方法 提取293T细胞基因组DNA,以其为模板进行PCR扩增,获得TLR2的3'UTR基因片段,连接至载体pmiR-RB-REPORT?,转化感受态E.coli DH5α,于LB(Amp+)固体培养基中培养过夜,菌落PCR筛选阳性克隆,并测序.根据TLR2 3'UTR与miR-122的预测结合靶点,设计突变型TLR2 3'UTR扩增引物,以构建的野生型TLR2 3'UTR重组质粒为模板,PCR扩增突变序列,相同方法进行载体连接及转化,挑取菌落,测序.结果 野生型TLR2 3'UTR重组菌经菌落PCR鉴定,可见1 000 bp的目的基因片段,大小与预期相符;测序结果表明,插入序列与TLR2 3'UTR序列完全一致.突变型TLR2 3'UTR重组质粒测序鉴定结果表明,靶序列CACTCC已更改为GTGAGG.结论 成功构建了野生型及突变型人TLR2 3'UTR重组质粒,本实验为TLR2功能的深入研究提供了实验依据.