舒洛地特通过调节NLRP3表达对视网膜Müller细胞凋亡的影响

目的 探究舒洛地特(SDX)通过调节NLRP3表达对视网膜Müller细胞凋亡的影响.方法 将24只清洁级C57BL/6小鼠随机数字表法分为4组,正常组、DR组、DR+DMSO组、DR+SDX组,各6只.除正常组小鼠外,均采用腹膜内注射链脲佐菌素(STZ)诱导实验性糖尿病视网膜病变(DR)模型.正常组小鼠,标准饲料喂养;DR组模型小鼠42％高脂肪饮食;DR+DMSO组模型小鼠2％高脂肪饮食+1 mL·kg-1·d-10.1％DMSO,DR+SDX组模型小鼠42％高脂肪饮食+1 g·kg-1·d-1 SDX,连续干预21 d.通过蛋白质印迹法检测NLRP3炎症小体(免疫受体NLRP3、接头蛋白ASC和蛋白酶caspase-1)和促炎因子白细胞介素(IL)-1β的表达水平.然后从小鼠眼组织分离原代视网膜Müller细胞,分别在正常葡萄糖(NG组,5 mmol/L)或高糖葡萄糖(HG组,30 mmol/L)培养,用NLRP3炎症小体抑制剂MCC950(10μmol/L)处理24 h(HG+MCC950组),并用5 mmol/L NLRP3激动剂三磷酸腺苷(ATP)处理30 min(HG+SDX+ATP组)或使用1 mmol/L活性氧清除剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)处理24 h(HG+NAC组),并用活性氧200μmol/L激动剂叔丁基过氧化氢(TBHP)处理最后3 h(HG+SDX+TBHP组),通过ELSIA检测氧化应激标志物活性氧、丙二醛、超氧化物歧化酶(SOD)和Müller细胞培养上清液中的血管内皮生长因子(VEGF)、造血生长因子(HGF)的表达水平.结果(1)与正常组相比,DR组NLRP3蛋白表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.05);与DR组和DR+DMSO组相比,DR+SDX组NLRP3蛋白表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05).(2)与正常组相比,DR组ASC、cleavedcaspase-1/pro-caspase-1、cleaved IL-1β/pro-IL-1β水平均显著增加,差异均有统计学意义(P<0.05);与DR组和DR+DMSO组相比,DR+SDX组NLRP3以上指标表达均显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05).(3)与NG组相比,HG组和HG+DMSO组Müller细胞和培养液中VEGF和HGF均显著增加,差异均有统计学意义(P<0.05);与HG和HG+DMSO组相比,HG+MCC950和HG+SDX组细胞和培养液中VEGF和HGF均显著降低,而HG+SDX+ATP则显著高于HG+SDX组,差异均有统计学意义(P<0.05).(4)与NG组相比,HG组和HG+DMSO组Müller细胞活性氧活性和丙二醛含量均显著增加,SOD活性则显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与HG和HG+DMSO组相比,HG+NAC和HG+SDX组细胞中活性氧活性和丙二醛含量均显著降低,SOD活性则显著增加,差异均有统计学意义(P<0.05);与HG+SDX组相比,HG+SDX+TBHP组活性氧活性和丙二醛含量均显著增加,SOD活性则显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 舒洛地特可通过抑制活性氧/NLRP3炎症小体信号转导来减轻高血糖诱导的Müller细胞增殖和促血管生成因子的产生.