Apbb1基因对心肌细胞增殖影响的探究

目的 探究β淀粉样蛋白前体蛋白结合蛋白B-1(Apbb1)基因对H9c2心肌细胞增殖的影响.方法 利用小干扰RNA与pcDNA3.1+质粒对H9c2心肌细胞系进行敲低与过表达Apbb1基因处理,通过CCK8实验、qPCR实验以及细胞免疫荧光实验检测细胞增殖情况,评价Apbb1基因对心肌细胞增殖的作用;利用在线数据库String分析APBB1蛋白的互作蛋白,探究其可能发挥作用的方式.实验分为4组:敲低对照组、敲低Apbb1组、过表达对照组和过表达Apbb1组.结果 相较于敲低对照组,敲低Apbb1组Apbb1基因表达下降52％(P<0.01,n=3),细胞增殖在48 h时下降44％(P<0.01,n=3),但是在72 h时细胞增殖增加86％(P<0.0001,n=3);细胞周期相关基因Ccnb1和Ccna2 mRNA表达水平分别升高80％(P<0.0001,n=3)和76％(P<0.0001,n=3);细胞免疫荧光实验发现PH3与Aurora B阳性细胞分别增加4.33％(P<0.01,n=3)和4.67％(P<0.05,n=3).相较于过表达对照组,过表达Apbb1组Apbb1基因表达上调119倍(P<0.001,n=3),细胞增殖在48 h与72 h分别降低1.23倍(P<0.0001,n=3)和1.04倍(P<0.0001,n=3);细胞增殖标志分子Ki67和细胞周期相关基因Ccnb1和Ccna2 mRNA表达水平分别降低25％(P<0.01,n=3)、72％(P<0.001,n=3)和38％(P<0.001,n=3);PH3与Aurora B阳性细胞分别降低3.7％(P<0.01,n=3)和4.36％(P<0.05,n=3).蛋白互作网络分析结果表明KAT5、APP与APLP2是APBB1互作最为显著的蛋白.结论 敲低Apbb1基因促进H9c2心肌细胞增殖,过表达Apbb1基因抑制H9c2心肌细胞增殖,Apbb1可能通过影响细胞周期G2/M期影响心肌细胞增殖,KAT5蛋白可能与APBB1蛋白互作影响心肌细胞增殖.