莲心碱体外吸收对AngⅡ诱导血管平滑肌细胞表型转化的影响

目的 通过检测血管平滑肌A7R5细胞内莲心碱的含量,同时测定不同浓度莲心碱对A7R5细胞活力的影响及莲心碱的药效作用,探究莲心碱进入细胞作用的效率与对A7R5细胞表型转换的影响.方法 体外培育大鼠血管平滑肌细胞A7R5细胞株,将其随机分为6组,分别用不同剂量莲心碱干预(0、5、25、50、100、200μg/mL),采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF/MS)检测不同浓度的莲心碱干预15 min时A7R5细胞质中莲心碱浓度;采用MTT法筛选莲心碱药物浓度后,选择对细胞无伤害的药物浓度,采用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导建立A7R5细胞表型转换模型,将其分为空白对照组(完全培养基)、AngⅡ组(1×10-6 mol/L AngⅡ)、莲心碱组(1×10-6 mol/L AngⅡ+10μg/mL莲心碱),干预24 h后,双转盘活细胞共聚焦实时成像分析系统观察A7R5细胞中表型转换标志物α-SMA的蛋白表达情况.结果 通过液质联用可检测到破碎细胞中莲心碱的含量,与干预浓度呈剂量依赖,空白对照和末次清洗细胞的PBS中未检测到莲心碱色谱峰,提示莲心碱可透过细胞膜进入细胞,且莲心碱进细胞效率为15.56％;AngⅡ诱导A7R5细胞由收缩型向合成型转换,其标志蛋白α-SMA表达减少,莲心碱干预后可抑制α-SMA表达量的降低.结论 莲心碱可透过A7R5细胞膜进入细胞,且抑制AngⅡ诱导的血管平滑肌细胞表型转换,该结果可能是莲心碱抑制高血压血管重构的作用机制之一.