Nrf2在黄芩素抑制氧化应激诱导心肌细胞凋亡中的作用

目的 探索核因子E2相关因子(Nrf2)在黄芩素抑制氧化应激诱导心肌细胞凋亡中的作用.方法 采用MTS、TUNEL细胞凋亡染色观察黄芩素对叔丁基过氧化氢(TBHP)诱导H9c2心肌细胞凋亡的影响,分子对接、分子动力学及表面等离子体共振技术(SPR)探索黄芩素与Nrf2的相互作用,Western blot法检测Nrf2、HO-1、NQO1蛋白表达,试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,Nrf2抑制剂ML385验证Nrf2在黄芩素抑制氧化应激诱导心肌细胞凋亡中的作用.结果 黄芩素能剂量依赖性地抑制TBHP诱导的心肌细胞活力降低和凋亡率升高(P<0.01),抑制TBHP诱导的SOD、GSH-Px活性降低(P<0.01).分子对接发现,黄芩素与Keap1的Kelch位点结合,结合力为-9.0 kcal/mol,与Keap1的氨基酸残基形成氢键.分子动力学与SPR研究发现,黄芩素与Keap1结合的平衡解离常数(KD)为6.54×10-7 mol/L,具有很强的结合能力,黄芩素剂量依赖性地上调Nrf2、HO-1、NQO1的表达(P<0.05),ML385抑制了黄芩素对TBHP诱导心肌细胞凋亡的保护作用.结论 黄芩素能抑制氧化应激导致的心肌细胞凋亡,其机制与激活Nrf-2信号通路有关.