邻苯二甲酸二乙基己酯(DEHP)通过调控Wnt/β-catenin信号通路加重肝纤维化的机制研究

基于Wnt/β-catenin信号通路探究邻苯二甲酸二乙基己酯(DEHP)在加重肝纤维化中的调控机制.选取60只雄性SD大鼠,随机分成6组:正常组、CCl4造模组、CC14+DEHP(0.05、5和500 mg·kg-1)暴露组和单独DEHP暴露(500 mg·kg-1)对照组.通过皮下注射50％CC14(0.1 mL·100g1)诱导肝纤维化模型,每周2次,同时从造模开始给予DEHP灌胃,共9周.采用HE和MASSON染色观察肝脏组织病理学变化和胶原沉积情况;采用ELISA法检测血清中透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、三型前胶原(PCⅢ)和Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)的水平;免疫组化法和Western Blot法检测肝脏组织中Wnt/β-catenin信号通路蛋白的表达水平;体外将人肝星状细胞(LX-2)分为正常组,DEHP刺激组(50 μmol·L-1),DEHP刺激组(100μmol·L-1)及DEHP(100 μmol·L-1)+FH535(1 μmol·L-1)(Wnt/β-catenin 信号通路阻断剂)组,共培养24 h,RT-PCR法检测各组细胞中β-catenin和α-SMA mRNA的表达水平.体内实验结果显示,与正常组相比,CC14模型组中肝纤维化指标(HA、LN、PCⅢ、Ⅳ-C)的水平、肝组织病理损伤、胶原沉积以及肝组织中Wnt1、β-catenin蛋白的表达水平明显升高.与CC14模型组相比,随着DEHP暴露剂量的增加,肝纤维指标(HA、LN、PC Ⅲ、Ⅳ-C)及肝脏的病理损伤显著加重,并上调Wnt1、β-catenin的表达,尤其在CC14+DEHP(500 mg·kg-1)组中较为明显;体外细胞实验结果显示,与正常组相比,DEHP(50、100 μmol·L-1)两个剂量组均能显著刺激LX-2细胞中β-catenin和α-SMA mRNA的表达,给予FH535(1 μmol·L-1)(Wnt/β-catenin信号通路阻断剂)后,β-catenin和α-SMA mRNA表达水平明显降低,差异具有统计学意义,p＜0.05.DEHP能显著加重肝纤维化大鼠的病理损伤和纤维化的形成,其机制可能与介导的Wnt/β-catenin信号通路有关.