p38/JNK MAPK信号通路对MEHP致小鼠睾丸间质细胞凋亡的影响

目的 探讨p38/c-Jun氨基末端激酶(JNK)丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路对邻苯二甲酸单(2-乙基己基)酯[mono(2-ethylhexyl)phthalate,MEHP]致小鼠睾丸间质(TM-3)细胞凋亡的影响及其作用机制.方法 将对数生长期的TM-3细胞分别暴露于p38抑制剂SB203580(5、10、20、40μmol·L-1)、JNK抑制剂SP600125(2.5、5、10、20μmol·L-1)24 h后,采用CCK-8法检测细胞活性,确定后续SB203580及SP600125干预组染毒剂量;将TM-3细胞分别暴露于0、200、400、800μmol·L-1 MEHP、10μmol·L-1 SB203580+400μmol·L-1 MEHP和10μmol·L-1 SP600125+400μmol·L-1 MEHP溶液24 h后,光镜下观察细胞形态;CCK-8法检测细胞活性;Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡情况;荧光探针DCFH-DA法检测细胞活性氧(ROS)水平;免疫印迹法(Western blot)检测细胞p38、p-p38、JNK、p-JNK、Caspase-3和Caspase-9蛋白表达水平.结果 与对照组相比,200、400、800μmol·L-1 MEHP剂量组ROS水平、凋亡率均升高(P均<0.05),细胞内p38和JNK蛋白表达水平差异均无统计学意义(P均>0.05),蛋白p-p38、p-JNK、Caspase-9和Caspase-3表达均增高(P均<0.05),且随着MEHP染毒剂量的升高,增高越明显(P均<0.05).与400μmol·L-1 MEHP剂量组相比,SB203580干预组和SP600125干预组贴壁细胞数量增多,细胞间隙减小,细胞增殖率上升,细胞凋亡率和ROS水平均降低(P均<0.05),p38和JNK蛋白表达差异均无统计学意义(P均>0.05),p-p38、p-JNK、Cas-pase-9和Caspase-3蛋白表达均减少(P均<0.05).结论 MEHP可通过激活p38/JNK MAPK信号通路诱导TM-3细胞凋亡.